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ELISA实验洗涤技术要点

发表时间:2025-07-29
1. 手工洗板:
    操作步骤:每次反应温育后,将反应液吸出或甩干,然后在板孔中加满洗液,放置2~3分钟,再将洗液吸出或甩干并用吸水纸拍干。重复洗涤3~4次,最后拍干。
    注意事项:
  1. 洗液量:加入的洗液量应以刚满反应孔为限,避免孔口内有游离酶未洗净。
  2. 避免孔间污染:吸液或甩干时要垂直,避免交叉感染。
  3. 吸水纸:使用一次性吸水纸,选择不易脱落碎屑的材质。
  4. 拍干:拍干时用力要轻,避免抗原抗体复合物脱落,且时间应尽量短以防止酶失活。

2. 洗板机洗板:
    优势:速度快,条件恒定,人为因素少。
    操作要点:
  1. 洗涤参数:确保所有反应孔的洗涤量相同,通常建议使用350μl洗涤液进行洗涤。
  2. 洗涤次数:一般要求洗涤4~5次,过多或过少都会影响结果,过多可能降低信号强度,过少则可能增加假阳性。
  3. 吸液高度:调整吸液高度,避免残留过多未结合物。
  4. 吸头类型:浮动洗头可自动调整,刚性洗头需要精确调整吸液高度。

3. 洗板技术:
    洗涤量:根据试剂盒推荐,调整至足够覆盖整个反应孔壁的量。
    吸液操作:垂直倒液,迅速、干脆,避免手腕左右摇摆或旋转。
    残留液体:残留量越少,背景信号越低,但需避免吸头压得太紧导致吸液效率降低。

4. 洗液配方:
    非离子型洗涤剂:如吐温20,浓度在0.05%~0.2%之间,过高会解吸附抗原或抗体。
    流水冲洗:适用于微量滴定板,增加水流量或水压可增强洗涤效果,但需注意防止孔间污染。

5. 洗涤缓冲液:
    配制:使用新鲜无污染的蒸馏水或去离子水配制,避免结晶影响。
    使用:现配现用,确保洗液新鲜。

6. 洗涤后的处理:
    拍干:拍干后应尽快进行下一步操作,减少暴露时间以防止酶失活。
    板布局:记录每次洗涤的顺序,确保每个孔的显色时间一致。
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